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中文名:人尿酸(UA)ELISA KIT

英文名:

别名:相关类别:ELISA

储存条件:2-8℃

产品编号:kt99387 货号:69-99387

人尿酸(UA)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

实验原理

人尿酸(UA)试剂盒含量是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物AB,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


封板膜

2片(48

2片(96


密封袋

1个

1个


酶标包被板

48

96

2-8℃保存

标准品

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

注:标准品用标准品稀释液依次做倍比稀释

标本要求: 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 加样:标准品设定5个浓度点10个孔,每个浓度设定平行孔,加入50微升不同浓度的标准品,空白孔设定1个孔加入50微升蒸馏水(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔,在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟

3. 配液:将3048T20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048T20倍)倍稀释后备用。

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

5. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

6. 温育:操作同2

7. 洗涤:操作同4

8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 

9. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项:

1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6底物请避光保存。

7严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9本试剂不同批号组分不得混用。

11. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释

倍数,即为样品的实际浓度。

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

2.批内与批间应分别小于9%11%

保存条件及有效期:

1.试剂盒保存:2-8

2.有效期:6个月

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