摘要：[目的]1、对RVVC和VVC患者的致病假丝酵母菌进行菌种鉴定,分析菌种分布情况;2、对致病假丝酵母菌进行基因分型,分析菌株的基因型分布及与其来源的关系:3、对致病假丝酵母菌进行3种抗真菌药物(氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑)的体外药物敏感性实验,比较菌株对3种抗真菌药物的敏感性差异,分析不同菌株的药物敏感性与其来源及基因型间的关系;4、测定致病假丝酵母菌的分泌型天冬氨酸蛋白酶、细胞外磷脂酶活性及其Sap-2、PLB-1的表达量,分析致病假丝酵母菌的侵袭力相关因子与其来源、基因型及药敏情况之间的关系。[方法]1、所有致病菌株均取自我院妇产科门诊外阴阴道假丝酵母菌病患者,其中RWC致病菌株95株,VVC致病菌株223株,均分离纯化后先用科玛嘉念珠菌显色培养基、安图念珠菌显色培养基初步鉴定菌种,最后用生物梅里埃VITEK 2系统鉴定明确菌种;2、提取样本的基因组DNA,根据样本255rDNA基因编码区可转座I型内含子的有无及大小,通过PCR技术对270株致病白假丝酵母菌进行基因分型;3、采用美国临床和实验室标准化研究院(Clinical And Laboratory Standards Institute,CLSI)制定的M27-A3方案推荐的微量稀释法进行体外药敏实验,根据CLSI提供的折点值结合实验得出的最小抑菌浓度判断药物敏感性;4、采用牛奶培养基及蛋黄培养基分别测定样本的分泌型天冬氨酸蛋白酶及细胞外磷脂酶活性;5、ELISA法测定样本的Sap-2及PLB-1的表达量。6、运用统计学软件对实验数据进行统计学分析。[结果]1、共收集到外阴阴道假丝酵母菌病致病菌318株,包括非妊娠期VVC致病菌196株,其中白假丝酵母菌186株(94.9%),非妊娠期RVVC致病菌75株,其中白假丝酵母菌69株(92.0%),妊娠期VVC致病菌27株,全部(100%)鉴定为白假丝酵母菌,妊娠期RVVC致病菌20株,其中白假丝酵母菌19株(95%);提示妊娠与非妊娠VVC及RVVC致病菌株均以白假丝酵母菌为主,在全部标本中一共检出17株非白假丝酵母菌,其中以光滑假丝酵母菌为主(52.9%)。2、270株白假丝酵母菌分为3种基因型,其中A型237株(87.8%)为不含内含子菌株,B型23株(8.5%)和C型10株(3.7%)为含内含子菌株;不含内含子组(A型)和含内含子组(B型+C型)两组基因型菌株在妊娠与非妊娠WC及RVVC患者致病菌株中的构成比差异无统计学意义,P>0.05,A基因型菌株最为多见。3、非妊娠RWC组及VVC组致病白假丝酵母菌的药物敏感性均为氟康唑最高,伊曲康唑最差;非妊娠VVC患者不同基因型菌株中,不含内含子组(A型)和含内含子组(B型+C型)两组的24h氟康唑、两性霉素B及伊曲康唑的敏感率均无统计学差异,P>0.05;48h氟康唑敏感率无统计学差异,P>0.05;不含内含子组(A型)菌种48h两性霉素B敏感率高于含内含子组,而伊曲康唑敏感率低于含内含子组,均有统计学差异,P<0.05。4、非妊娠VVC患者不同基因型菌株3种药物的体外药敏实验MIC值均有显著性差异,P<0.05,不含内含子组(A型)菌株的氟康唑和伊曲康唑24h及48h MIC值均高于含内含子组(B型+C型)菌株,而两性霉素B 24h及48h MIC值低于含内含子组菌株。5、非妊娠RVVC菌株中,含内含子组致病白假丝酵母菌的细胞外磷脂酶阳性率及酶活性高于不含内含子组菌株,有统计学差异,P<0.05。6、非妊娠RVVC致病白假丝酵母菌中伊曲康唑敏感株的天冬氨酸蛋白酶活性比非敏感株强,有统计学差异,P<0.05。7、RVVC患者致病白假丝酵母菌的Sap-2及PLB-1的表达量均明显高于VVC患者致病白假丝酵母菌,其中PLB-1的表达量差异有统计学意义,P<0.05。[结论]1、白假丝酵母菌仍是妊娠与非妊娠VVC及RVVC的主要致病菌种;2、氟康唑在三种抗真菌药物中敏感性最高,敏感率在95%以上,可作为临床治疗的首选;3、25SrDNA基因编码区可转座I型内含子的存在可能会影响阴道致病白假丝酵母菌对氟康唑、两性霉素B及伊曲康唑的药物敏感性,并且其可能对白假丝酵母菌的细胞外磷脂酶活性有增强作用;而致病白假丝酵母菌的天冬氨酸蛋白酶活性可能与菌株对伊曲康唑的药物敏感性有关;4、外阴阴道假丝酵母菌病的复发可能与致病白假丝酵母菌的Sap-2及PLB-1表达量增加有关。 还原

关键词：复发性外阴阴道假丝酵母菌病; 基因分型; 药物敏感性; 侵袭力; 分泌型天冬氨酸蛋白酶; 磷脂酶;

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