向海雁鹅为向海鸿雁（Anser cygnoides）与籽鹅（Semen anserinum）杂交的物种。本文以向海雁鹅血为原料，对其多肽进行提取、分离、纯化并分析其成分；基于网络药理学及分子对接技术对其抗肺癌作用机制进行分析；并考察其抑制肺癌细胞的活性。研究内容如下：以新鲜向海雁鹅血为原料，水解度为指标，筛选工具酶；采用单因素实验，确定向海雁鹅血多肽的酶解工艺；通过响应面法优化向海雁鹅血多肽的最佳提取工艺；通过氨基酸分析仪对其氨基酸组成进行分析；采用Sephadex G-25 凝胶层析纯化分离向海雁鹅多肽。结果表明：优选出复合蛋白酶作为工具酶；最佳酶解工艺为超声功率540 W，超声波频率20 KHz，加酶量4000 U/g，超声时间4.5 h，此时水解度为28.77%；并测得其中含有17 种氨基酸，其中8 种为人体必需氨基酸；经Sephadex G-25 凝胶层析纯化得到向海雁鹅血多肽（XGP）。通过UPLC-Q-TOF-MS/MS 对XGP 成分组成进行分析；采用网络药理学方法对向海雁鹅血多肽的活性分、潜在靶点和分子机制进行预测；包括药物相似性评估、口服生物利用度预测、蛋白互作(PPI)网络构建和分析、基因本体论(GO)术语和通路注释；基于网络药理学，构建“成分-靶点-通路”的互作网络；利用分子对接模拟方法进一步说明了配体的活性位点和结合程度，解释了其可能的作用机制。结果表明分析其成分为H-Asn-Asp-Asp-Met-OH、Thr-Thr-Asn-Tyr-Thr-Asp、Ala-Trp-Met-Asp-Phe-Val；网络药理筛选出相关靶点258 个，通过PPI 筛选得到46 个核心靶点，如AKT1、IL1B、SRC、STAT3、MMP9 和CCND1 等；GO功能富集分析64 个条目，主要调控肺癌反应、蛋白质磷酸化、氧化还原过程等生物功能，影响着细胞增殖、凋亡、氧化还原等；KEGG 分析富集到56 个信号通路，主要包括PI3K-ATK、RAS、Hepatitis B 等信号通路；XGP 通过多成分、多靶点和多通路协同作用于肺癌的网络；向海雁鹅血多肽P1、P2、P3 与核心靶点AKT1、SRC、MMP9 具有良好的结合能力，证明向海雁鹅血多肽对肺癌具有潜在的抑制作用。采用CCK-8 法考察不同浓度的XGP 抑制人肺癌A549 细胞的增殖作用，考察不同浓度XGP 对细胞内Ca2+释放、细胞氧化损伤和ATP 的含量，使用XGP诱导人肺癌A549 细胞，采用qPCR 和Western blot 检测细胞关键通路靶蛋白的表达水平。结果表明：XGP 呈浓度和时间依赖性地抑制人肺癌A549 细胞的增殖；XGP 可能通过人肺癌A549 细胞发生Ca2+超载，氧化损伤，抑制ATP 的合成和干扰能量代谢使细胞凋亡；qPCR 结果显示XGP 可抑制核心靶点 AKT1 的表达水平；Western blot 结果显示XGP 通过降低AKT1 的mRNA 表达水平，从而起到抑制人肺癌细胞A549 的作用，进一步验证向海雁鹅血多肽对肺癌的抑制作用。向海雁鹅血多肽在抗肺癌方面具有广阔的应用前景，为未来向海雁鹅血的

开发应用提供了理论基础和参考依据。

氨基酸自动分析仪                           武汉默沙克生物科技有限公司