目的

探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）调控丝裂原活化蛋白激酶／ 核因子κＢ（ＭＡＰＫ／ ＮＦ⁃κＢ）信号通路对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的ＲＡＷ ２６４． ７ 细胞炎症反应的影响。方法取对数生长期的ＲＡＷ２６４． ７ 细胞，随机分为对照组、ＬＰＳ（１μｇ／ ｍＬ）组、ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｌ（１２． ５ μｍｏｌ／ Ｌ ）组、ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｍ（２５ μｍｏｌ／ Ｌ ）组、ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｈ（５０ μｍｏｌ／ Ｌ ）组、ＬＰＳ ＋ ＤＥＸ（阳性对照，０． ５ μｇ／ ｍＬ）组、ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｈ ＋ Ａｎｉｓｏｍｙｃｉｎ（３００ ｎｇ／ ｍＬ ＭＡＰＫ／ ＮＦ⁃κＢ 通路激活剂Ａｎｉｓｏｍｙｃｉｎ）组，细胞在添加对应的药物处理１ ｈ 后，再加入１００ μＬ １ μｇ／ ｍＬ ＬＰＳ，培养２４ｈ 后，进行后续相关实验。利用倒置显微镜观察各组细胞的形态特征；ＭＴＴ 法检测各组细胞的存活率；Ｇｒｉｅｓｓ 法检测各组细胞上清中一氧化氮（ＮＯ）含量；ＥＬＩＳＡ 法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子⁃α（ＴＮＦ⁃α）、白细胞介素⁃６（ＩＬ⁃６）、白细胞介素⁃１β（ＩＬ⁃１β）、白细胞介素⁃１０（ＩＬ⁃１０）的表达；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）、环氧化酶⁃２（ＣＯＸ⁃２）蛋白及ＭＡＰＫ／ ＮＦ⁃κＢ 通路相关蛋白的表达。结果各组细胞的存活率均大于９２％；与对照组比较，ＬＰＳ 组ＲＡＷ２６４． ７ 细胞形态呈梭形，细胞中ｉＮＯＳ、ＣＯＸ⁃２、ｐ⁃ｐ３８、ｐ⁃ＩκＢα、ｐ⁃ＮＦ⁃κＢ 蛋白及上清中ＮＯ含量、ＴＮＦ⁃α、ＩＬ⁃６、ＩＬ⁃１β 表达显著升高，ＩＬ⁃１０ 表达显著降低（Ｐ ＜ ０． ０５）；与ＬＰＳ 组比较，ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｌ 组、ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｍ组、ＬＰＳ ＋ ＥＧＣＧ⁃Ｈ 组、ＬＰＳ ＋ ＤＥＸ 组对应指标变化与上述相反，且ＥＧＣＧ 浓度越高，趋势越明显（Ｐ ＜０． ０５）；Ａｎｉｓｏｍｙｃｉｎ 可逆转高剂量ＥＧＣＧ 对ＬＰＳ 诱导ＲＡＷ２６４． ７ 细胞炎症反应的抑制作用。结论ＥＧＣＧ 可抑制ＬＰＳ 诱导的ＲＡＷ ２６４． ７ 细胞炎症反应，该机制与抑制ＭＡＰＫ／ ＮＦ⁃κＢ 信号通路有关。

ＭＴＴ 检测试剂盒                                   武汉默沙克生物科技有限公司